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微生物QPCR

快速、準確地測定目標微生物數(shù)量

微生物QPCR簡介

實時熒光定量PCR技術（Real-time Quantitative PCR，qPCR）是指在PCR反應體系中加入可與DNA產(chǎn)物特異性結(jié)合的熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，最終通過相對定量或絕對定量的方法確定各個樣本的本底表達量。微生物QPCR可用于快速、準確地測定目標微生物數(shù)量。

結(jié)果展示

目的基因的 qPCR 實驗結(jié)果，16s 標準品的制備及樣品的 qPCR 擴增（左：擴增曲線、右：熔解曲線）
標準品的標準曲線
目的基因的擴增曲線
目的基因的擴增曲線
目的基因的溶解曲線
目的基因的溶解曲線
基因標準曲線
基因標準曲線：拷貝數(shù)log值
拷貝數(shù)換算
拷貝數(shù)換算

服務優(yōu)勢

項目經(jīng)驗豐富，水體、土壤、糞便等樣本類型均可承接；

每個反應均為3個重復，結(jié)果穩(wěn)定性好；

SYBR 熒光染料法和 Taqman 探針法兩種方法均可提供。

微生物QPCR常見問題

相對定量內(nèi)參選擇標準是什么？

  1. 在不同處理中表達穩(wěn)定性較高的基因；
  2. 中等或高表達基因。

真核生物常見內(nèi)參：18S rRNA、β-actin、GAPDH、EF-1α等；原核生物：16S rRNA、gyrB等。如果無法確定內(nèi)參，建議參考文獻，或者做內(nèi)參篩選實驗。

如何選擇適合的引物和探針？

引物和探針的選擇需要考慮到目標微生物的特異性和保守性。可以使用公開可獲得的微生物基因數(shù)據(jù)庫，如NCBI，進行引物和探針設計。此外，確保引物和探針的互補性和避免引物之間的重疊和相互作用也很重要。

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